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簡(jiǎn)要描述：EZ Trans mRNA轉染試劑是一種結合了陽(yáng)離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點(diǎn)的轉染試劑，協(xié)同促進(jìn)轉染復合物進(jìn)入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放，能夠在多種細胞類(lèi)型中實(shí)現高效、低毒的轉染效果。
產(chǎn)品型號：AC04L061、AC04L062廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家更新時(shí)間：2024-09-19訪(fǎng) 問(wèn) 量：128產(chǎn)品分類(lèi)
Product Category詳細介紹
| 品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AC04L061、AC04L062 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 300uL、1mL | 供貨周期 | 現貨 |
| 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
信使核糖核酸（mRNA）在細胞質(zhì)中啟動(dòng)蛋白質(zhì)翻譯，不需要進(jìn)入細胞核，可實(shí)現比DNA轉染更快的蛋白表達，且避免基因整合風(fēng)險。
EZ Trans mRNA轉染試劑是一種結合了陽(yáng)離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點(diǎn)的轉染試劑，協(xié)同促進(jìn)轉染復合物進(jìn)入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放，能夠在多種細胞類(lèi)型中實(shí)現高效、低毒的轉染效果。
訂購信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號 | 規格 |
EZ Trans mRNA轉染試劑 | AC04L061 | 300 uL |
EZ Trans mRNA轉染試劑 | AC04L062 | 1 mL |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存，有效期 6 個(gè)月；-30℃至-10℃保存，有效期12個(gè)月。注：避免反復凍融。
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表 1）
1． 接種細胞
對于貼壁細胞：轉染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉染時(shí)密度為60%-80% 為佳。
對于懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養基 (無(wú)血清) 重懸細胞，在24孔板中進(jìn)行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。
2． 準備轉染試劑-mRNA復合物
(1) 對于每孔細胞，將 0.5 μg待轉染mRNA加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉染試劑與mRNA 混合，室溫孵育3 min。
(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養基(無(wú)血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉染試劑-核酸復合物。
(3) 30 min后，往上述復合物中加入250 μL Opti-MEM I減血清培養基(無(wú)血清)，輕輕混勻。
3． 轉染細胞
(1) 細胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉染試劑-mRNA復合物加入每孔細胞。
(2) 在 37℃，5% CO2 培養箱培養12 h，無(wú)需更換新的培養液，之后即可檢測轉染效果。若需更長(cháng)時(shí)間轉染，可在轉染12 h后補充500 μL培養基 (含血清)，總體積達到 500μL，即達到常規的培養皿使用培養液的量，12-36 h后再進(jìn)行檢測。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. mRNA質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度、無(wú)菌、無(wú)污染、無(wú)內毒素的優(yōu)質(zhì)mRNA?？梢酝ㄟ^(guò)對mRNA進(jìn)行加帽(相比于Cap0結構，帶有Cap1 結構的mRNA對于哺乳動(dòng)物系統更適合)，使用N1-甲基-假尿苷修飾和添加poly(A)尾，以增強mRNA的穩定性和壽命。
3. 整個(gè)實(shí)驗過(guò)程使用無(wú)RNA酶和無(wú)熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。
4. 細胞條件：細胞狀態(tài)會(huì )極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長(cháng)狀態(tài)，建議使用生長(cháng)處于指數期、存活率大于90% 的細胞進(jìn)行轉染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。
5. 細胞培養液要求：EZ Trans mRNA轉染試劑轉染實(shí)驗要求采用無(wú)血清轉染體系(推薦使用Opti-MEM減血清培養基)，因為血清會(huì )影響復合物的形成及mRNA轉染效率。
6. 由于某些特殊培養基中的成分可能會(huì )抑制陽(yáng)離子聚合物介導的轉染，因此建議測試這些培養基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉染效果。
7. 試劑用量的優(yōu)化：RNA 濃度和轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響，初次使用應優(yōu)化mRNA 濃度和轉染試劑用量以得到最大的轉染效率。通常情況下，24孔板的推薦mRNA用量為0.2-1 μg，轉染試劑推薦用量為2-4 μL。建議初次使用時(shí)，可在推薦范圍內進(jìn)行不同用量的預實(shí)驗，以?xún)?yōu)化轉染效果。
表 1：不同培養體積對應的待轉mRNA、 EZ Trans、稀釋液用量
培養器皿 | 培養液體積 （mL） | mRNA 量 （μg ） | 轉染試劑 (μL) | Opti-MEM I培養基a (μL) | Opti-MEM I培養基b (μL) |
96 孔板 | 0.1 | 0.1 | 0.4 | 20 | 50 |
24 孔板 | 0.5 | 0.5 | 2 | 100 | 250 |
12 孔板 | 1 | 1 | 4 | 200 | 500 |
6 孔板 | 2 | 2 | 8 | 400 | 1000 |
60 mm 培養皿 | 4 | 4 | 16 | 800 | 2000 |
100 mm 培養皿 | 10 | 10 | 40 | 2000 | 5000 |
注：該表使用量?jì)H供參考，具體使用量還需根據細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件進(jìn)行優(yōu)化。a: 稀釋轉染試劑-mRNA復合物所需培養基的量；b: 加入轉染試劑-mRNA復合物的培養基的量。
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