單鏈cDNA合成試劑盒（逆轉錄）

產(chǎn)品描述

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質(zhì)量的單鏈 cDNA 合成試劑盒，包含熱穩定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分，僅需添加 RNA 模板和水即可啟動(dòng)反應，生成的 cDNA 主要用于后續的 qPCR 分析。

提取的RNA 樣本常存在基因組DNA（gDNA）污染，可能導致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時(shí)擴增，影響定量準確性。本試劑盒通過(guò) dsDNase 高效去除gDNA，特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈，并在逆轉錄溫度下快速不可逆失活。與傳統使用的 DNase I對比，無(wú)需額外 EDTA 處理，簡(jiǎn)化實(shí)驗流程，降低逆轉錄反應的抑制風(fēng)險。

本試劑盒可在同一管中進(jìn)行逆轉錄和gDNA去除兩個(gè)反應，操作簡(jiǎn)便，可有效降低復雜加樣過(guò)程造成的樣品污染和 RNA 降解的風(fēng)險。但若基因組污染嚴重程度，建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉錄分開(kāi)進(jìn)行的操作方法。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃保存，有效期24個(gè)月。

使用方法

1. 針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品（推薦方案）

① 于冰上配制如下反應體系：

a . 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量 RNA 作為模板。

② 37℃溫育 2 min，以去除gDNA 污染；

③ 55℃溫育 15 min；

④ 反應結束后，85℃溫育 5 min 以終止反應；

⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上，用于后續實(shí)驗；或立即保存于 -20℃。

2. 針對基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品

(1)  基因組 DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應體系：

a.    推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；

注：若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴重，可適當延長(cháng) 37℃溫育時(shí)間至 5 min。

④ 65℃溫育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。

(2)  第一鏈 cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應體系：

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 50℃溫育 15 min；

注：若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構，可預先 25℃溫育 10 min。

④  反應結束后， 85℃溫育 5 min，以終止反應；

⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后續實(shí)驗。

注：cDNA 溶液置于 -20℃儲存，建議不超過(guò) 1 周；置于 -80℃可長(cháng)期儲存。

注意事項

1. 預混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物，適用于含有 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小RNA模板。

2. 由于隨機引物會(huì )在RNA的任意位置啟動(dòng)逆轉錄，因此不建議使用本產(chǎn)品進(jìn)行真核生物全長(cháng)cDNA的克隆。

3. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。